期刊简介
本刊是中国中西医结合学会主办，中国科学技术协会主管、国内外公开发行的国家级学术期刊。本刊执行“中西医并重、促进中西医结合”方针，旨在报道我国中西医结合在临床、科研、预防等方面的经验，介绍国内外有关肾病专业的进展，为提高中西医结合水平，继承和发扬我国传统的医药学，促进我国医学科学现代化服务。全国各医疗卫生单位内科、肾内科、儿科、妇产科、中医科、泌尿科等医务人员及相关的科研、教学人员均可参阅。
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首页>中国中西医结合肾病杂志
- 杂志名称：中国中西医结合肾病杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中国中西医结合学会
- 国际刊号：1009-587X
- 国内刊号：14-1277/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国科学引文数据库 中国科学引文数据库来源期刊 万方数据-数字化期刊群期刊收录：统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 知网收录(中), 万方收录(中), 国家图书馆馆藏, 维普收录(中), 上海图书馆馆藏
EPHX2基因过表达质粒的构建及意义探讨
费敏；李平；赵婷婷；孙斯凡；古艳婷；王华；张浩军；杨靖
关键词：EPHX2, 重组质粒, NF-κBp65, 糖尿病肾病
摘要：目的:构建LETO、OLETF大鼠EPHX2基因过表达重组质粒,观察其在人胚肾细胞(human embryonic kidney 293T,HEK293T)中的表达,及对HEK293T细胞NF-κBp65 mRNA表达的影响.方法:提取LETO、OLETF大鼠肾脏组织总RNA,RT-PCR方法扩增编码EPHX2基因的cDNA,克隆至T-载体并测序,经亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1/V5-His,构建两型大鼠EPHX2过表达重组质粒,酶切鉴定并测序,采用磷酸钙共沉淀法转染HEK293T细胞系.Western Blot方法检测EPHX2融合蛋白的表达,RT-PCR方法检测EPHX2基因过表达对HEK293T细胞NF-κBp65表达水平的影响.结果:(1)两个重组质粒均含有完整EPHX2 cDNA,测序证实OLETF型大鼠较LETO型大鼠EPHX2重组质粒有五个核苷酸位点的改变.(2)转染HEK293T细胞后,Western Blot证实融合蛋白成功表达;(3)TNF-α刺激增加HEK293T细胞中NF-κBp65 mRNA表达;(4)EPHX2基因过表达促进TNF-α刺激后的HEK293T细胞中NF-κBp65 mRNA表达升高(P<0.05).结论:成功构建LETO型及OLETF型大鼠EPHX2过表达重组质粒(L-EPHX2/V5、O-EPHX2/V5),可在HEK293T细胞中过表达.为进一步探讨EPHX2基因在糖尿病肾病发生发展中的作用奠定了基础.
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